哔哩哔哩2023-06-14 12:52:27
【资料图】
蛋白质胶条进行质谱分析主要包括胶内蛋白质提取和后续质谱检测两个部分，胶内蛋白质提取的大致流程包括切胶、清洗和脱色、胶内酶解以及肽段提取等；接着将肽段进行液相色谱-串联质谱检测。
在该实验的操作过程中首先要将电泳胶上的目标蛋白条带切下，需要注意的是尽量切胶条的内圈，避免切到其他的条带造成污染；接下来对胶条进行清洗和脱色，将切下的胶条水洗后加入脱色液进行脱色，然后利用碳酸氢铵和乙腈进行处理，使胶条的颜色完全褪去，并置于37℃条件下自然干燥；最后将蛋白酶溶液加入干燥的胶粒中，使胶粒完全泡涨，胶粒中的蛋白质得以充分酶解；利用TFA和乙腈溶液提取酶解后肽段，并在氮气流中将提取的肽段溶液吹干，至此就获得了可以进行质谱分析的蛋白质肽段样本。质谱分析过程相比胶内酶解过程简单许多，蛋白肽段利用色谱技术分离后就可以直接进行质谱检测，然后将质谱数据与理论蛋白数据进行比较、匹配、打分和错配过滤，以实现蛋白肽段以及完整蛋白的鉴定。
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